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    点击次数:894 发布时间:2018-09-10

    浅析牛垂体提取物的作用与意义所在

        牛垂体提取物是由牛脑垂体制备的提取物,有研究表明BPE具有明显改善人垂体腺瘤细胞体外无血清培养条件的作用,对离体培养的垂体腺瘤细胞增殖具有促进作用。常用作无血清细胞培养的生长补充剂,可促进上皮细胞、内皮细胞和黑色素细胞增殖,广泛用作各种上皮细胞和黑色素细胞培养中的补充剂。此外,其具有抗氧化能力,可对抗过氧化氢诱导的细胞坏死,蛋白质氧化,膜破碎和DNA损伤。BPE是无血清的促有丝分裂添加剂,含有天然生长因子的独特混合物,可与MCDB系列(MCDB170或MSDB154)或DMEM / Ham's F12的基础培养基组合使用。能刺激人支气管h皮细胞的生 氢化可的松对支气管卜皮细胞及肺癌细胞的 长。’“但牛垂体提取物对肿瘤细胞生长的作生长均有刺激作用。Invitrogen,DMEM/F12培养基为Gibico产品,L-谷氨酰胺、胎牛血清和丙酮酸钠为国产,一抗为小鼠抗人角蛋白8/18型单克隆抗体,配制,即在DMEM/F12中加入终浓度分别为10μg/mL INS、0·1μg/mL HC。mmol/L谷氨酰胺、100 IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素、50 IU/mL两性霉素B及10 IU/mL庆大霉素,为无血清培养液。完全培养基配制。基础培养基中按需加入10μg/mL TF、20 ng/mL T3、25 ng/mL EGF、牛垂体提取物及5%~10%血清。1·1·4主要仪器400目铁网滤筛、25 cm2塑料培养瓶(Costar),24孔细胞培养板,6孔细胞培养板,94 mm细胞培养皿,普通离心机,超净工作台,血球计数板,混合纤维脂微孔滤膜(0·22、0·45μm),滤器,针头式滤器。对于单层中上皮细胞的生长,推荐浓度为35?70ug / ml BPE。通过使用优化的基础培养基如MCDB170或MCDB154,浓度可以降低。确定BPE浓度的有效方法是在选择的细胞上进行简单的生长测定。建议将产品分装成单次使用体积,以避免反复冻融所引起的可能活性损失。
        牛垂体提取物存在时才表现出强的促MC生长作用,提示其他未确定的脑衍生促分裂剂在MC的生长中起到怍用‘“。神经生长因子(NGF) NGF是一仲对神经系统有营养及分比怍用的多肽,它具有促进中枢及周围神经系统发育生长、促进伤口愈合及影响肥大细胞、B淋巴细胞等多种功能’“。作为起源于胚胎神经嵴的MC是否也受到NGF的影响以及表皮内角朊细胞能否分泌NGF一直是人们关注的问题。Peaeocke等醴j分别用免疫荧光法、免疫印迹及DNA印迹技术证实了当培养基内含有50ng/mI浓度的。TPA时,MC表达NGF受体,培养基中除去垂体提取物或血清后,受体量减少约1/2,uV照射后MC也表达NGF受体。在用不同剂量的NGF培养MC后,发现其细胞数量无差异,提示NGF可能仅对MC的存活起到一定作用。Yaar’等0。’的进一步研究表明,在MC培养基中加入NGF‘后其表达NGF的mRNA含量明显增加并观察到NGF可促进MC的移动及分支形成,同时用Nor’thern印迹技术证实表皮角朊细胞可表达NGF的mRNA,该发现为表皮内NGF可来自角朊细胞提供了证据。

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