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            点击次数:329 发布时间:2018-03-13

            【推荐】蛋白marker精彩问答

             Western Blot (WB)即蛋白免疫印迹实验,是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小讲蛋白分离,再通过电场力将蛋白转移到杂交膜上。然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB是进行蛋白质分析zui流行和成熟的技术之一。

             

            在WB过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样,只是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个WB参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用,所以选择正确的蛋白Marker也是WB实验成功的必要条件之一。 本篇讨论Western Blot实验中关于蛋白Marker的常见问题分析,有助于成功完成WB。


            Q:预染蛋白Marker是什么?有何用途?

            A:预染蛋白Marker是一些纯化好的蛋白,通过与染料共价耦联后混合而成。在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白Marker的出现方便了我们的实验,这种蛋白Marker可以帮助我们在电泳时、电泳后,以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如,已知垂直电泳zui佳分辨区域大约在胶的2/3处,如果使用预染Marker就可以预测目标蛋白进入zui佳分辨区时停止电泳以得到zui佳分辨效果;如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳;另外在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否完全,还可以在膜上标记蛋白分子量。所以越来越受到使用者的热捧。


            Q:蛋白Marker为什么跑的条带不清楚?

            A:原因很多哦,首先确认胶的浓度、PH值,离子强度是不是正常,这些都会影响条带的质量。其次确定电泳液的PH、离子强度是否正确,如甘氨酸浓度太低时,蛋白会浓缩不好;电泳液zui好新鲜配制。

            其次,确认蛋白Marker是否降解或者染料是否脱落。absin生产的预染蛋白Marker采用独有的技术,能保证染料不会从蛋白上脱落。且经过试验证实,预染蛋白Marker能在4°C保存3月之久,而不易降解。


            Q:预染蛋白Marker的种类?

            A:预染蛋白Marker可以分为两种:单色预染和多色预染。Marker条带越多参考价值越大,可就越难辨认区分,如果用不同的颜色来区别就比较好辨认啦。absin为您提供了含多种染料的预染Marker,方便您区分分子量区间。其所涵盖的分子量范围从10kDa到245kDa,完全满足日常所需。


             

            Q:为什么预染蛋白Marker对分子量的衡量不是很精确?

            A:预染蛋白Marker与染料共价耦联,所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化,可能导致一些偏差。不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样,我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小,zui后都需要Western来定性,所以如果不是要区分大小相近的条带,预染Marker还是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。另外,absin提供了在常用的电泳缓冲体系下,预染蛋白Marker的相对分子量,方便使用者对分子量的预判。


            Q:爱必信广谱型蛋白预染marker特点是什么?

            A:

                 1、使用方便:可在冷水或热水中快速溶解,可直接上样,无需加热或煮沸;

                 2、与各种膜兼容:彩色条带在WB中可转移到膜上成像;

                 3、更清晰,更易观察;

                 4、每批次均经过SDS-PAGE和WB的验证  

                 5、足量耐用:一支500ul至少跑100块8*10cm胶

                 6、不易降解


            Q:爱必信广谱型蛋白预染marker实验结果图?


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