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            点击次数:1928 发布时间:2017-03-31

            ECL发光液使用说明

            ECL 显色原理:鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物,也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中,含有H2O2和鲁米诺,在HRP(辣根过氧化物酶)的作用下,发出荧光来。

            产品描述:

            ECL化学发光超敏显色试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体及其关联的抗原。其原理是,蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白,或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液,室温孵育膜数分钟,将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时,显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。

            采用独特的发光底物系统,降低曝光背景的同时引入新型的氧化剂,大大提高试剂盒的稳定性,使其在室温能稳定放置一年。除用于X光片,还可直接使用荧光CCD扫描,主要用于WB检测以及化学发光免疫检测系统。


            优势:

               ● 极高灵敏度:可检测低至10-100pg级的抗原

               ● 极高信噪比:优化配方,背景很低

               ● 极高性价比:节省一抗和二抗,缩短实验周期,降低经济和时间成本

               ● 极高稳定性:持续发光时间长,4℃条件下保存时间可达6个月以上

               ● 可对X光胶片曝光,也可直接进行luminometer检测或者荧光CCD扫描。


            试验步骤:

               1. 执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。常温操作即可。

               【注】:ECL发光液是HRP的显色底物,因此检测系统zui终必须基于HRP酶标记抗体或者核酸探针。

               2. zui后一次洗膜的同时,新鲜配制发光工作液:分别取等体积的A液和B液1:1混合,混匀后,室温放置备用。

               【注】:取A液和B液一定要用不同的枪头;另建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。(100~200μl发光工作液/cm2膜)

               3. 用平头镊取出膜,膜的下缘轻触在滤纸上除去多余洗液(勿使膜完全干燥)。将膜完全浸入发光工作液中,与发光工作液充分接触。室温孵育1-3分钟,准备立即压片曝光。

               【注】:孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小,但勿降低发光液使用比例。

               4. 用平头镊子夹起膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,去除膜上多余的液体,留下少量工作液,不可让膜完全干燥。

               5.将膜迅速包裹于洁净的保鲜膜里,去除气泡和皱褶,用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。

               6. 暗房内取一张X光胶片至于包裹的膜上,压片,分别曝光不同的时间,如数秒到数分钟,定影显影冲洗。

               【注】:曝光时间需根据曝光强度做相应的调整。若是背景过高,可使用两张X光胶片同时压片。


            注意事项:

               1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

               2)步骤1~5可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的干净。

               3)长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。

               4)发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因此弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。

               5)由于发光液灵敏度高,抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败,所以要适度优化抗体浓度。

               6)某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。

               7)避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

               8)使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。

               9)使用生物素-亲和素系统,避免使用牛奶封闭,可能会导致背景过高。

               10)金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,建议使用塑料的平头镊子。

               11)叠氮化钠(NaN3)能抑制HRP活性,若回收HRP标记探针或者抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。

               12)本品无特殊毒性,按普通化学品处理。

             

            货号产品名称规格
            abs920超敏ECL化学发光检测试剂盒2*25ml
            abs921超敏ECL化学发光检测试剂盒2*50ml
            abs920B-500超敏ECL化学发光检测试剂盒2*250ml

             

            爱必信特色产品线:

            生化试剂(60万种)、抗体(10万种)、细胞因子、二抗、ECL发光液、蛋白marker、激动剂、抑制剂、凋亡试剂盒、BSA、动植物提取物、蛋白酶K...

             


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